一、新物體識(shí)別介紹

對(duì)象位置任務(wù)（OLT）和新穎物體識(shí)別任務(wù)（NORT）是兩種常用的有效行為任務(wù)，它們用于揭示參與記憶的特定腦區(qū)的功能和相對(duì)健康狀況。雖然這兩種測(cè)試都利用了老鼠對(duì)新穎性的天生偏好來揭示對(duì)先前遇到的物體的記憶，但OLT主要評(píng)估空間學(xué)習(xí)，這在很大程度上依賴于海馬體活動(dòng)。相比之下，NORT評(píng)估的是非空間學(xué)習(xí)的物體識(shí)別，這依賴于多個(gè)腦區(qū)。

OLT（對(duì)象位置測(cè)驗(yàn)）是一種簡單而有效的測(cè)試，可提供海馬依賴性空間記憶的度量。該任務(wù)依賴于動(dòng)物對(duì)新奇性的固有偏好，而不需要額外的外部強(qiáng)化，因此通常可以避免與不同情緒反應(yīng)相關(guān)的復(fù)雜性。該協(xié)議包括讓小鼠適應(yīng)曠場(chǎng)測(cè)試區(qū)域，然后允許其與空間環(huán)境線索相關(guān)的2個(gè)物體進(jìn)行探索。然后，將小鼠從測(cè)試區(qū)域移出，在延遲（試驗(yàn)間隔或ITI）期間，移動(dòng)其中一個(gè)物體的位置。ITI結(jié)束后，將小鼠重新引入測(cè)試區(qū)域，并允許其自由探索。總體而言，小鼠更喜歡新奇性，如果它們記得初始暴露時(shí)物體的位置，它們將花更多時(shí)間調(diào)查移動(dòng)的物體。海馬損傷的動(dòng)物在空間背景學(xué)習(xí)方面存在缺陷，因此在新位置不會(huì)對(duì)物體表現(xiàn)出偏好。

OLT可以獨(dú)立使用，也可以與另一種依賴多個(gè)腦區(qū)神經(jīng)活動(dòng)的記憶測(cè)試相結(jié)合，即新對(duì)象識(shí)別任務(wù)（NORT）。NORT與OLT相同，直到測(cè)試階段，其中一個(gè)物體被一個(gè)新物體替換，而不是被移到新位置。與OLT一樣，記得物體的小鼠會(huì)自發(fā)地更喜歡調(diào)查新物體。與強(qiáng)烈依賴海馬底物的對(duì)象位置記憶不同，對(duì)象識(shí)別記憶似乎依賴于多個(gè)腦區(qū)，并且海馬的參與尚未解決。許多研究報(bào)告稱，海馬損傷或失活不會(huì)影響新對(duì)象的偏好，而其他研究發(fā)現(xiàn)相反。然而，它仍然是評(píng)估嚙齒動(dòng)物一般記憶功能的常用任務(wù)。

二、新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)protocol

1.測(cè)試前一周：

讓小鼠熟悉進(jìn)行行為測(cè)試的人員

每天處理6至9周齡的成年雌雄C57Bl/6小鼠1分鐘，持續(xù)3-5天。

2.第一天：習(xí)慣化會(huì)話

2.1將小鼠分為4組，將它們移到單獨(dú)的干凈飼養(yǎng)籠中。

2.2將它們帶入測(cè)試房間，讓它們至少適應(yīng)測(cè)試房間30分鐘。

2.3當(dāng)適應(yīng)完成并且實(shí)驗(yàn)人員準(zhǔn)備好開始時(shí)，開始使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

2.4將每只小鼠放置在場(chǎng)地（每個(gè)場(chǎng)地一只小鼠）面向釋放角的墻壁。

2.5讓小鼠自由探索場(chǎng)地6分鐘。

2.6停止錄制視頻。

2.7在試驗(yàn)間隔期間將小鼠返回它們的干凈固定籠中。

2.8使用動(dòng)物設(shè)施推薦的清潔方法清潔所有場(chǎng)地，例如用70%的酒精擦拭以最小化嗅覺線索。

重復(fù)步驟2.3–2.8再進(jìn)行兩次，為每只小鼠進(jìn)行總共3次習(xí)慣化會(huì)話。

2.9將所有小鼠返回它們的飼養(yǎng)籠中。

2.10使用動(dòng)物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場(chǎng)，以最大限度地減少第二天使用前的嗅覺線索。

3.第二天：訓(xùn)練測(cè)試

3.1 24小時(shí)后，將同一組老鼠帶入測(cè)試室，并讓它們適應(yīng)測(cè)試室至少30分鐘，和前一天習(xí)慣化訓(xùn)練前的操作一樣。

3.2 使用2個(gè)放置在曠場(chǎng)中的物體進(jìn)行訓(xùn)練試驗(yàn)。

3.3 使用雙面膠帶，將物體固定在兩個(gè)非釋放角落的6×6厘米處，使它們?cè)跁鐖?chǎng)中平衡并且不會(huì)被小鼠移動(dòng)。

3.4 開始使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

3.5 將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置，和前一天習(xí)慣化訓(xùn)練前的操作一樣

3.6 允許老鼠自由探索曠場(chǎng)和物體10分鐘。

3.7 停止錄制視頻。

3.8 將老鼠放回它們的干凈保持籠子中，間隔時(shí)間（ITI）為20分鐘。

3.9 使用動(dòng)物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場(chǎng)和物體，以最大限度地減少嗅覺線索。

4 第二天:進(jìn)行OLT

訓(xùn)練測(cè)試后進(jìn)行OLT。

將訓(xùn)練試驗(yàn)中使用的一個(gè)物體移動(dòng)到新的非釋放角落，并使用雙面膠帶將物體固定在那個(gè)角落的每個(gè)墻壁距離6厘米的位置。

注意：只需要移動(dòng)一個(gè)物體，另一個(gè)物體應(yīng)該和訓(xùn)練試驗(yàn)期間的位置一樣，保持不變。

4.1使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

4.2將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置。

4.3允許老鼠探索物體10分鐘。

4.4停止錄制視頻。

4.5將老鼠放回它們的干凈保持籠子中，間隔時(shí)間（ITI）為20分鐘。

4.6 使用動(dòng)物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場(chǎng)和物體，以最大限度地減少嗅覺線索。

5.進(jìn)行NORT

OLT結(jié)束后進(jìn)行NORT。

5.1用一個(gè)新的物體替換OLT期間未移動(dòng)的物體，并使用雙面膠帶將這個(gè)新物體固定在角落的兩面墻壁距離6厘米的位置。

5.2使用行為學(xué)分析軟件（如VisuTrack）錄制并分析視頻。

5.3將每只老鼠面向釋放角落的墻壁放置。

5.4允許老鼠探索物體10分鐘。

5.5停止錄制視頻。

5.6將老鼠放回它們的飼養(yǎng)籠子。

5.7使用動(dòng)物設(shè)施推薦的清潔方法（如使用70%的乙醇擦拭）清潔所有曠場(chǎng)和物體，以最大限度地減少下次使用前的嗅覺線索。

三、 分析行為測(cè)試數(shù)據(jù)

注意：視頻分析理想情況下應(yīng)由至少兩名獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)人員完成。

打開視頻文件。

在屏幕上應(yīng)用一個(gè)透明圓圈，圍繞每個(gè)物體提供2厘米的邊界，以幫助確定主動(dòng)探查。使用在曠場(chǎng)放置尺子的視頻文件圖像來校準(zhǔn)這個(gè)距離。

觀察老鼠的行為，并記錄老鼠主動(dòng)探查物體的時(shí)間，包括它的鼻子指向物體，距離該物體最大2厘米。

記錄老鼠開始探查物體的時(shí)間點(diǎn)和停止探查物體的時(shí)間點(diǎn)。并計(jì)算老鼠探查每個(gè)物體的累積時(shí)間。

計(jì)算總探查時(shí)間的百分比 =（與新位置或物體的時(shí)間）/（與新位置或物體的時(shí)間 + 與熟悉位置或物體的時(shí)間）×100

注意：超過50%的值表明對(duì)新位置或物體的探查更多。

計(jì)算區(qū)分指數(shù) =（與新位置或物體的時(shí)間 - 與熟悉位置或物體的時(shí)間）/（與新位置或物體的時(shí)間 + 與熟悉位置或物體的時(shí)間）

注意：正值表明更多時(shí)間用于探查新物體。區(qū)分指數(shù)為零表示與兩個(gè)物體花費(fèi)相同的時(shí)間。

使用t檢驗(yàn)或ANOVA等統(tǒng)計(jì)分析方法，根據(jù)比較的群體數(shù)量適當(dāng)?shù)貓D形表示結(jié)果并完成統(tǒng)計(jì)分析。